Báo cáo: Cố định vi khuẩn bằng hydroxide kim loại làm tăng độ nhạy của phương pháp PCR khi phát hiện vi khuẩn trong thực phẩm
Ngành:
Nông nghiệp, Công nghệ Sinh học
Tóm tắt nội dung tài liệu:
Nghiên cứu này giới thiệu một phương pháp tiên tiến nhằm nâng cao hiệu quả phát hiện vi khuẩn gây bệnh trong thực phẩm thông qua kỹ thuật phản ứng chuỗi polymerase (PCR). Phương pháp này tích hợp hai kỹ thuật chính: cố định vi khuẩn bằng hydroxide kim loại và xử lý bằng enzyme DNase I. Việc sử dụng DNase I giúp loại bỏ DNA từ các tế bào vi khuẩn không còn sống, từ đó giảm thiểu đáng kể khả năng xảy ra kết quả dương tính giả. Để theo dõi và định lượng DNA trong quá trình khuếch đại, nghiên cứu ứng dụng thuốc nhuộm SYBR Green I trong phản ứng PCR thời gian thực, cho phép xác định số lượng vi khuẩn ban đầu trong mẫu. Kết quả thực nghiệm cho thấy, phương pháp cố định vi khuẩn bằng hydroxide kim loại đạt tỷ lệ thu hồi ấn tượng, dao động từ 93,6% đến 99,3%, vượt trội hơn hẳn so với phương pháp không sử dụng kỹ thuật này (chỉ đạt 31,5% - 54,7%). Hơn nữa, kỹ thuật này cho phép cô đặc mẫu lên đến 50 lần, góp phần tăng cường độ nhạy của phương pháp PCR. Nghiên cứu đã xác định được giới hạn phát hiện cho các chủng vi khuẩn quan trọng như E. coli O157:H7, L. monocytogenes, E. coli wild type và S. typhimurium ở nồng độ rất thấp trong mẫu sữa tươi.
Mục lục chi tiết:
- SUMMARY
- INTRODUCTION
- MATERIALS AND METHODS
- Bacterial strains
- Metal hydroxide preparation
- Preparation of aliquots of cell suspensions
- DNA isolation
- PCR primers
- Real time PCR amplifications
- Gel electrophoresis
- Standard curve for bacterial strains in real-time PCR assay
- Evaluation of bacterial immobilization with metal hydroxides by real-time PCR
- Feasibility of DNase I treatment in discriminating viable and unviable bacterial cells immobilized by zirconium hydroxide in food model (1 ml of whole milk)
- Sensitivity of DTD-PCR in detecting metal hydroxide immobilized bacteria in food application (10 ml of whole milk)
- RESULTS
- Standard curves in real-time PCR assay
- DISCUSSION
- CONCLUSION
- Acknowledgement
- REFERENCES