Giới thiệu
Nghiên cứu này tập trung vào việc phân lập và đặc tính hóa một hoạt tính DNA polymerase nhạy cảm với dideoxynucleotide (ddNTP) từ các tế bào nội bội hóa của cây đậu Mung (Vigna radiata L.) trong quá trình phát triển của lá mầm. Hoạt tính enzyme này được xác định từ các hạt đậu ở giai đoạn 18 ngày sau thụ tinh.
Đặc tính của Enzyme DNA Polymerase
Enzyme được phân lập là một polypeptide đơn lẻ với khối lượng phân tử 62 kDa. Các đặc tính sinh hóa của enzyme này cho thấy sự tương đồng đáng kể với DNA polymerase β ở động vật có vú. Cụ thể, enzyme thiếu hoạt tính exonuclease 3'-5' và sở hữu hoạt tính điền các khoảng trống ngắn trong DNA cũng như hoạt tính dịch chuyển chuỗi. Enzyme này thể hiện khả năng tổng hợp DNA ở mức độ vừa phải trên khuôn mẫu chuỗi đơn.
So sánh và Ý nghĩa
Chuỗi heptapeptide N-terminal của enzyme cho thấy sự tương đồng cao với vùng xoắn 1 của miền liên kết DNA chuỗi đơn N-terminal của DNA polymerase β ở chuột cống và người. Những phát hiện này cung cấp bằng chứng đầu tiên về việc xác định và đặc tính hóa một DNA polymerase nhạy cảm với ddNTP được biểu hiện trong quá trình nội bội hóa, đồng thời chia sẻ sự tương đồng về mặt sinh hóa và miễn dịch với DNA polymerase β ở động vật có vú.
Mục lục chi tiết:
- Giới thiệu
- Kết quả
- Hoạt tính DNA polymerase nhạy cảm với ddNTP trong hạt đậu đang phát triển trong quá trình nội bội hóa
- Phát hiện biểu hiện của một polypeptide 62-kDa trong hạt đậu đang phát triển, nội bội hóa
- Phân tích các bước tinh sạch, xác định khối lượng phân tử và các đặc tính chung của enzyme DNA polymerase đậu
- Đặc tính hóa enzyme DNA polymerase đậu nhạy cảm với ddNTP
- Độ xử lý của DNA polymerase đậu tinh sạch
- So sánh trình tự N-terminal của DNA polymerase đậu với các DNA polymerase X-family khác
- Tổng hợp DNA điền khe hở ngắn và hoạt tính dịch chuyển chuỗi bởi DNA polymerase đậu
- Hoạt tính sửa lỗi 3'-5' exonuclease của DNA polymerase đậu
- Thảo luận
- Quy trình thực nghiệm
- Vật liệu
- Chuẩn bị chiết xuất protein hòa tan trong dung dịch đệm từ hạt đậu đang phát triển
- Tinh sạch DNA polymerase nhạy cảm với ddNTP
- Xét nghiệm DNA polymerase in vitro
- Phân tích SDS/PAGE và Western Blotting
- Phân tích gel hoạt tính
- Tổng hợp kéo dài chuỗi primer
- Xét nghiệm điền khe hở ngắn
- Hoạt tính sửa lỗi 3'-5' exonuclease của DNA polymerase đậu
- Tài liệu tham khảo