Giới thiệu Đề tài
Tên đề tài: Ứng dụng dẫn xuất cobalamin huỳnh quang phân tích động học liên kết với protein vận chuyển
Ngành: Hóa sinh protein, Sinh học phân tử, Hóa học, Sinh lý học và Vật lý sinh học, Hóa sinh y học, Hóa sinh lâm sàng.
Tóm tắt nội dung tài liệu:
- Nghiên cứu này giới thiệu việc sử dụng dẫn xuất cobalamin (Cbl) có gắn huỳnh quang (CBC) để phân tích động học liên kết với hai protein vận chuyển quan trọng: yếu tố nội tại (IF) và transcobalamin (TC).
- Việc gắn nhóm huỳnh quang rhodamine vào vị trí 5' OH-ribose của Cbl tạo ra một đầu dò huỳnh quang hiệu quả, cho phép theo dõi trực tiếp quá trình liên kết và phân ly.
- Kết quả cho thấy CBC có ái lực tương đương với Cbl khi gắn vào TC. Tuy nhiên, tương tác với IF phức tạp hơn, đặc biệt là với các mảnh vỡ của IF.
- Phân tích động học chi tiết đã chứng minh CBC có khả năng ứng dụng như một tác nhân báo cáo trong các nghiên cứu động học liên kết.
- Đặc biệt, CBC cho thấy tiềm năng ứng dụng trong các nghiên cứu hình ảnh hóa sinh học.
Mục lục chi tiết:
- Introduction
- Keywords
- Correspondence
- Abstract
- Cobalamin (Cbl, vitamin B12) is a cofactor...
- Abbreviations
- Application of a fluorescent Cbl analogue
- Results
- Preparation of the proteins
- Synthesis of the fluorescent Cbl analogue CBC-244
- Spectral properties of CBC
- Binding of CBC to IF or TC
- Binding of CBC to IF fragments IF20 or IF30
- Association of the fragments IF20-CBC + IF30
- Competitive binding of CBC and Cbl, calculation of k+
- Dissociation of IF-CBC and IF-Cbl in 'chase' experiments
- Dissociation of TC-ligand complexes
- Dissociation of the cleaved IF-ligand complexes
- Reliability of CBC-fluorescence method
- Binding of IF-CBC and IF-Cbl to the specific receptor
- Discussion
- Experimental procedures
- Materials
- Methods
- Expression and purification of human recombinant IF and TC
- Synthesis of the fluorescent Cbl analogue CBC-244
- Measurement of fluorescence spectra
- Measurement of the binding kinetics with fluorescent probe CBC
- Measurement of the dissociation kinetics with the fluorescent probe CBC
- Measurement of the dissociation kinetics by absorbance method
- Binding of IF to the receptor
- Data processing
- Acknowledgements
- References