Xác định gen L-rhamnose-1-dehydrogenase đầu tiên ở nấm men Pichia stipitis
Nghiên cứu này công bố việc xác định thành công gen mã hóa cho enzyme L-rhamnose-1-dehydrogenase (RHD1) trong nấm men Pichia stipitis. Enzyme này đóng vai trò quan trọng trong con đường chuyển hóa L-rhamnose, một con đường không trải qua các sản phẩm trung gian được phosphoryl hóa, từng được quan sát ở sinh vật nhân thực nhưng chưa xác định được gen mã hóa.
Sử dụng kỹ thuật khối phổ MALDI-TOF MS, các nhà khoa học đã phân tích trình tự peptide của enzyme đã được tinh sạch, từ đó nhận dạng được gen RHAI. Gen này mã hóa cho một protein thuộc họ alcohol dehydrogenase bậc thấp. Protein RHAI đã được biểu hiện thành công trong Saccharomyces cerevisiae và thể hiện hoạt tính xúc tác đối với L-rhamnose, L-lyxose và L-mannose, với ái lực cao nhất đối với L-rhamnose.
Phân tích Northern blot cho thấy biểu hiện của gen RHAI có thể được cảm ứng bởi L-rhamnose, khẳng định vai trò của gen này trong quá trình chuyển hóa L-rhamnose.
Mục lục chi tiết:
- Keywords
- Correspondence
- Abstract
- Introduction
- Results
- Northern analysis
- Discussion
- Experimental procedures
- Enzyme assays
- Enzyme purification
- In-gel digestion and MALDI-TOF MS
- Cloning of the ORF, site-directed mutagenesis and heterologous expression
- Northern analysis
- Acknowledgements
- References